Isolasi Flavonoid pada Bunga Rosella

PRAKTIKUM TEKNIK PEMISAHAN

(ISOLASI FLAVONOID PADA BUNGA ROSELLA)

Kelompok 2:

1.   Cahya Mayang jayanti             (11.006)

2.   Diah Rukmi P.                          (11.011)

3.   Ifam pambudi                           (11.021)

4.   Vivin Restu anggraini              (11.044)

AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG

BAB 1

PENDAHULUAN

Latar belakang

Bunga rosella merupakan tanaman yang sekarang terkenal hampir di seluruh penjuru dunia. Tanaman ini juga mulai populer di Indonesia. Rosella atau yang lebih dikenal dengan nama teh merah, sebenarnya tanaman ini sudah lama ada di Indonesia, hanya saja, ia disebut dengan nama yang berbeda di setiap daerah,  banyak orang yang beranggapan berbeda tentang asal mula rosella tersebut. Ada yang bilang bahwa rosella berasal dari afrika, namun ada juga yang bilang rosella berasal dari India. Namun yang jelas bahwa sesungguhnya rosella telah banyak ditemukan di Indonesia sejak beberapa abad yang lalu. Hanya saja masyarakat indonesia belum begitu mengenal manfaat atau khasiat dari rosella tersebut. Barulah pada akhir-akhir ini diketahui bahwa teh merah rosella memiliki manfaat yang banyak sekali, namun tidak mengakibatkan efek samping seperti pada teh yang lainnya.

Bunga rosella adalah salah satu tanaman obat yang dapat digunakan sebagai obat tradisional. Bunga rosella mempunyai nama ilmiah Hibiscus Sabdariffa Linn dari famili malvaceae pada awalnya merupakan tumbuhan liar yang tidak diketahui manfaatnya, sekarang merupakan tumbuhan budidaya yang populer dan hampir seluruh bagian tanaman ini dapat digunakan untuk kebutuhan pengobatan, terutama untuk pengobatan alternatif. Hal ini dikarenakan bunga rosella mengandung senyawa metabolit sekunder yang diduga mempunyai efek antibakteri. Adapun kandungan  kimia dari tumbuhan rosella adalah alkaloid, flavonoid, triterpen, steroid, dan fenolik. Kandungan kimia bunga rosella yang diduga mempunyai efek sebagai antibakteri adalah flavonoid. Dimana kandungan flavonoid mampu menghambat dan membunuh kuman - kuman, mikroorganisme yang bisa menyebabkan penyakit pada manusia.

Pengambilan flavonoid secara umum dari bahan alam menggunakan prinsip dasar ekstraksi, ada dua macam metode ekstraksi yang digunakan yaitu ekstraksi dengan pelarut menggunakan cara dingin  dan ekstraksi menggunakan pelarut dengan cara panas. Akan tetapi untuk mengisolasi flavonoid digunakan metode ekstraksi dengan cara dingin karena flavonoid tidak tahan panas dan rusak pada suhu tinggi.

Dalam mengisolasi bunga rosella dapat mengetahui bagaimana cara mengisolasi dan mengetahui kandungan flavonoid bunga rosella. Adapun metode yang digunakan yaitu metode maserasi, perkolasi dan evaporasi. Dipilih metode ini karena prosesnya cepat dan mudah. Setelah dihasilkan ekstrak kental dari serbuk bunga rosella maka dilakukan identifikasi senyawa flavonoid menggunakan reaksi warna. Alasan menggunakan reaksi warna yaitu bahannya mudah didapatkan dalam skala lab, serta prosesnya mudah.  Kemudian hasil ekstrak kental yang mengandung flavonoid diharapkan berfungsi untuk obat tradisional, khususnya sebagai obat anti bakteri atau jamur, karena kandungan flavonoid dalam bunga rosella dapat menghambat pertumbuhan bakteri atau jamur yang dapat menyebabkan penyakit pada tubuh manusia.

Rumusan Masalah

1.      Metode apa yang digunakan untuk mengisolasi flavonoid dari bunga rosella?

2.       Bagaimana cara menguji senyawa flavonoid?

Tujuan

1.      Untuk mengetahui metode apa yang digunakan untuk mengisolasi flavonoid dari bunga rosella.

2.      Untuk mengetahui bagaimana cara menguji senyawa flavonoid yang diekstrak dari bunga rosella.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Bunga rosella

Tumbuhan rosella tumbuh liar di pinggir-pinggir jalan, perkebunan dan sawah di Indonesia. Warna, bentuk dan ukuran sedikit berbeda disetiap daerah. Bahkan tidak hanya warna, bentuk dan ukurannya namun sebutannya pun satu daerah dan daerah lain berbeda. Misalnya ada yang menyebut rosella kembang gandaria, karena rasa asamnya mirip buah gandaria dan ada juga yang menyebutnya kembang frambosen karena warnanya mirip dengan buah frambosen.

2.1.1 Nama umum

Indonesia        :           Rosella, perambos, gamet walanda (Sunda), kasturi roriha (Ternate)

Inggris             :           Roselle, red sorrel

Cina                 :           luo shen kui,  luo shen hua

2.1.2 Klasifikasi

Kingdom         : Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom    : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi    : Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi               : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas               : Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)

Sub Kelas        : Dilleniidae

Ordo                : Malvales

Famili              : Malvaceae (suku kapas-kapasan)

Genus              : Hibiscus

Spesies            : Hibiscus sabdariffa L.

2.1.3Morfologi
Tinggi tanaman rosela mencapai 0,5-2,4 m (Lampung Post, 2004). Tipe daun tanaman ini adalah daun tunggal tidak lengkap (daun bertangkai) dengan tipe duduk daun majemuk menyirip gasal berseling dan warna daun dewasa bervariasi dari hijau tua sampai merah kekuningan. Batang tanaman bulat, berserat dan bercabang. Tanaman rosela memiliki akar tunggal yang cukup dalam. Buah tanaman rosela berwarna hijau tua dan mampu mencapai diameter 5,3 cm dan panjang 5 cm

2.1.4 Kandungan bunga rosella

Bunga rosella mengandung omega 3 yang terdapat dalam kelopaknya yang bermanfaat untuk pertumbuhan dan kecerdasan otak anak. Asam sitrat dan asam malat memberi sensasi yang menyegarkan ketika kelopak diseduh. Dari segi kesehatan, rosella mempunyai manfaat untuk mencegah penyakit. Menurut penelitian Ballitas Malang, bunga rosella, terutama dari tanaman yang berkelopak bunga tebal ( juicy), misalnya rosella merah berguna untuk mencegah penyakit Kanker dan radang, mengendalikan tekanan darah, melancarkan peredaran darah dan melancarkan buang air besar. Gossy peptin anthocyanin dan glucoside hibiscin yang mempunyai efek diuretik dan choleretik, memperlancar peredaran darah, mencegah tekanan darah tinggi, meningkatkan kinerja usus serta berfungsi sebagai tonik ( obat kuat). Dari segi penelitian terbukti bahwa kelopak bunga rosella mempunyai efek anti-hipertensi, kram otot dan anti infeksi-bakteri. Dalam eksperimen ditemukan juga bahwa ekstrak kelopak bunga rosella mengurangi efek alkohol pada tubuh kita, mencegah pembentukan batu ginjal, dan memperlambat pertumbuhan jamur atau bakteri penyebab demam tinggi. kelopak bunga rosella juga membantu melancarkan peredaran darah dengan mengurangi derajat kekentalan darah. Ini terjadi karena asam organik, poly-sakarida dan flavonoid yang terkandung dalam ekstrak kelopak bunga rosella sebagai antibakteri. Selain itu yang tidak kalah pentingnya adalah kelopak bungga rosella mengandung vitamin C dalam kadar tinggi yang berfungsi untuk meningkatkan daya tahan tubuh manusia terhadap serangan penyakit.

2.2 Flavonoid

Senyawa flavonoid diturunkan dari unit C₆-C₃( fenil propana) yang bersumber dari asam sikimat (fia fenilalanin) dan unit C₆ yang ditunkan dari jalur poliketida. Frakmen poliketida ini disusun dari 3 molekul malonil-koA, yang bergabung dengan unit C₆-C₃ (sebagai koA tioester)untuk membentuk unit awal triketida. Oleh karena itu flavonoid yang berasal dari bio sintesis gabungan terdiri atas unit-unit yang diturunkan dari asam sikimat dan jalur poliketida. Unit awal triketida mengalami siklisasi oleh enzim kalkon sintase untuk membentuk gugus kalkon pada flavonoid. Kemudian terjadi siklisasi untuk menghasilkan cincin piranon yang mengandung inti flavanon, yang dapat  memiliki ikatan C₂-C₃ teroksidasi (tak jenuh) untuk menghasilkan gugus flavon

2.2.1 Sifat kelarutan Flavonoida

Aglikon flavonoida adalah polifenol dan karena itu mempunyai sifat kimia senyawa fenol, yaitu bersifat agak asam sehingga dapat larut dalam basa. Tetapi harus diingat, bila dibiarkan dalam larutan basa, dan di samping itu terdapat oksigen, banyak yang akan terurai. Karena mempunyai sejumlah gugus hidroksi, atau suatu gula, flavonoida merupakan senyawa polar, maka umumnya flavonoida cukup larut dalam pelarut polar seperti Etanol, Metanol, Butanol, Aseton, Dimetilsulfoksida (DMSO), Dimetilformamida (DMF), Air dan lain-lain. Adanya gula yang terikat pada flavonoida (bentuk yang umum ditemukan) cenderung menyebabkan flavonoida lebih mudah larut dalam air dan dengan demikian campuran pelarut yang disebut diatas dengan air merupakan pelarut yang lebih baik untuk glikosida. Sebaliknya, aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon dan flavon serta flavonol yang termetoksilasa cenderung lebih mudah larut dalam pelarut seperti Eter dan Kloroform.

(Markham, 1988)

2.2.2Flavon
Flavon mudah dipecah oleh alkali menghasilkan diasil metan atau tergantung pada kondisi reaksi, asam benzoate yang diturunkan dari cincin A. flavon stabil terhadap asam kuat dan eternya mudah didealkilasi dengan penambahan HI atau HBr, atau dengan aluminium klorida dalam pelarut inert. Namun demikian, selama demetilasi tata ulang sering teramati oleh pengaruh asam kuat dapat menyebabkan pembukaan cincin pada cara yang lain. Sebagai contoh demetilasi 5,8-dimetoksiflavon dengan HBr dalam asam asetat menghasilkan 5,6 dihidroksiflavon (persamaan 1). Dalam keadaan khusus pembukaan lanjut dapat terjadi (persamaan2). Demetilasi gugus 5-metoksi dalam polimetoksiflavon segera terjadi pada kondisi yang cocok, sehingga 5-hidroksi-polimetoksiflavon mudah dibuat.

2.2.4 Simplisia bunga rosella

Simplisia adalah bentuk jamak dari kata simpleks yang berasal dari kata simple, berarti satu atau sederhana. Istilah simplisia dipakai untuk menyebutkan bahan-bahan obat alam yang masih berada dalam wujud aslinya atau belum mengalami perubahan bentuk. Departemen Kesehatan RI membuat batasan tentang simplisisa sebagai berikut:

Simplisia adalah bahan alami yang digunakan untuk obat dan belum mengalami proses perubahan apapun, dan kecuali dinyatakan lain umumnya dalam bentuk yang telah dikeringkan. Sebelum dilakukan isolasi flavonoid, sampel bunga rosella disimplisiakan terlebih dahulu dengan cara :

1.   Pengumpulan bahan baku

Tahapan pengumpulan bahan baku sangat menentukan kualitas bahan baku. Faktor yang paling berperan dalam tahapan ini adalah masa panen. Berdasarkan garis besar pedoman panen, pengambilan bahan baku tanaman dilakukan sebagai berikut :

2.      Bunga

Pemanenan bunga tergantung dari tujuan pemanfaatan kandungan aktifnya. Panen dapat dilakukan pada saat menjelang penyerbukan, saat bunga masih kuncup.

3.       Sortasi basah

Sortasi basah adalah pemilahan hasil panen ketika tanaman masih segar. Sortasi basah dilakukan untuk memisahkan kotoran-kotoran atau bahan-bahan asing atau bahan-bahan asing lainnya dari bahan simplisia.

4.      Pencucian

Pencucian dilakukan untuk menghilangkan pengotoran lainnya yang melekat pada bagian simplisia. Pencucian dilakukan dengan air bersih, misalnya air dari mata air, air sumur atau air PAM. Bahan simplisia yang mengandung zat yang mudah larut dalam air yang mengalir, pencucian dilakukan dalam waktu yang sesingkat mungkin dengan cara dialirkan air ke bahan simplisia.

5.      Perajangan

            Beberapa jenis bahan simplisia perlu mengalami proses perajangan. Perajangan bahan simplisia dilakukan untuk mempermudah proses pengeringan, pengempakan dan penggilingan. Tanaman yang baru diambil jangan langsung dirajang tetapi dijemur dalam keadaan utuh selama 1 hari. Perajangan dapat dilakukan dengan pisau, dengan alat mesin perajang khusus sehingga diperoleh irisan tipis atau potongan dengan ukuran yang dikehendaki.

6.        Pengeringan

      Tujuan pengeringan adalah untuk mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak, sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama. Suhu pengeringan tergantung pada bahan simplisia dengan cara pengeringannya. Bahan simplisia dapat dikeringkan pada suhu 30°C-90°C, tetapi suhu yang terbaik adalah tidak lebih dari 60°C. Bahan simplisia yang mengandung senyawa aktif yang tidak tahan panas atau mudah menguap harus dikeringkan pada suhu serendah mungkin, misalnya 30°C-45°C.

7.      Dijadikan serbuk

Setelah dihasilkan simplisia yang kering, kemudian dilakukan Dihaluskan dengan mesin penggiling (blender), kemudian diayak dengan ayakan, Simplisia kering halus disimpan dalam wadah yang bersih dan kering, lalu serbuk siap diekstrak.

 Simplisia bunga rosella yang digunakan adalah serbuk dari bunga Digunakan serbuknya karena serbuk memiliki luas permukaannya lebih kecil jadi pelarut mudah masuk ke dalam pori-pori simplisia daun jambu biji dibandingkan dengan menggunakan tanaman segar daun jambu biji masih mengandung kadar air sehingga dapat mempengaruhi konsentrasi pelarut. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96% karena tidak banyak mengandung kadar air sehingga hasil ekstraksi lebih kental dan murni.

2.4 Metode isolasi flavonoid

Metode yang digunakan dalam isolasi flavonoid adalah metode maserasi, perkolasi, dan evaporasi. Adapun alat-alat yang digunakan adalah :

1.      Maserasi

Meserasi berasal dari istilah mecaration dari bahasa latin macerace, yang artinya merendam, merupakan proses paling tepat dimana obat yang sudah halus memungkinkan untuk direndam dalam mentrum sampai meresap dan melunak susunan sel, sehingga zat – zat yang mudah larut akan melarut. (Ansel, 1989 : 607). Maserasi merupakan penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dengan cairan penyari. Cairan penyari yang menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang diluar sel, maka larutan yang terpekat didesak ke luar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel.

Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah mengembang dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, stirak dan lain-lain. Cairan penyari yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol, atau pelarut lain. Bila cairan penyari maka untuk mencegah  timbulnya kapang, dapat ditambahkan bahan pengawet, yang diberikan pada awal penyarian.

Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan. Kerugian cara maserasi adalah pengerjaannya lama dan penyariannya kurang sempurna

Maserasi pada umumnya dilakukan dengan cara: 10 bagian simplisia dengan derajat halus yang cocok dimasukkan ke dalam bejana, kemudian dituangi dengan 75 bagian cairan penyari, ditutup dan dibiarkan selama minimal 24 jam,  terlindung dari cahaya, sari diserkai.(sediaan galenik,1986).

2.      Perkolasi

Perkolasi berasal dari bahasa latin per artinya melalui dan colore yang artinya merembes, secara umum dapat dinyatakan sebagai proses dimana obat yang sudah halus, zat yang larutannya diekstraksi dalam pelarut yang cocok dengan cara melewatkan perlahan-lahan melalui obat dalam suatu kolom. Obat dimampatkan dalam alat ekstraksi yang khusus disebut perkolator, dengan ekstraksi yang telah dikumpulkan disebut perkolat. Kebanyakan ekstraksi obat dikerjakan dengan cara perkolasi. (Ansel, 1989 : 608). Perkolasi adalah cara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi

Prinsip perkolasi adalah sebagai berikut :

Serbuk simplisia ditempatkan dalam suatu bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut, cairan penyari akan melarutkan zat aktif sel-sel yang dilalui sampai mencapai keadaaan jenuh. Gerak ke bawah disebabkan oleh kekuatan gaya berratnya sendiri dan cairan di atasnya, dikurangi dengan gaya kapiler yang cenderung untuk menahan.

Kekuatan yang berperan pada perkolasi antara lain : gaya berat, kekentalan, daya larut, tegangan permukaan, difusi, osmosa, adesi, daya kapiler dan daya geseran (friksi)

Kelebihan cara perkolasi :

a.       Aliran cairan penyari mennyebabkan adanya pergantian larutan yang terjadi dengan larutan yang konsentrasinya lebih rendah, sehingga meningkatkan derajat perbedaan konsentrasi.

b.      Ruangan diantar butir-butir serbuk simplisia membentuk saluran tempat mengalir cairan penyari, karena kecilnya saluran kapiler tersebut, maka kecepatan pelarut cukup untuk mengurangi lapisan atas, sehingga dapat meningkatkan perbedaan konsentrasi.

Alat yang digunakan untuk perkolasi disebut perkolator, cairan yang digunakan untuk menyari disebut cairan penyari atau menstrum, larutan zat aktif yang keluar dari perkolator disebut sari atau perkolat, sedang sisa setelah dilakukannya penyarian disebut ampas atau sisa perkolasi. Bentuk perkolator ada 3 macam yaitu perkolator berbentuk tabung, perkolator berbentuk paruh dan perkolator berbentuk corong. (sediaan galenik,1986).

3.      Evaporasi

        Evaporasi merupakan suatu proses penguapan sebagian dari pelarut sehingga didapatkan larutan zat cair pekat yang konsentrasinya lebih tinggi. Tujuan dari evaporasi itu sendiri yaitu untuk memekatkan larutan yang terdiri dari zat terlarut yang tak mudah menguap dan pelarut yang mudah menguap. Dalam kebanyakan proses evaporasi, pelarutnya adalah air. Evaporasi tidak sama dengan pengeringan, dalam evaporasi sisa penguapan adalah zat cair, kadang-kadang zat cair yang sangat kental, dan bukan zat padat. Begitu pula, evaporasi berbeda dengan distilasi, karena disini uapnya biasanya komponen tunggal, dan walaupun uap itu merupakan campuran, dalam proses evaporasi ini tidak ada usaha untuk memisahkannya menjadi fraksi-fraksi. Biasanya dalam evaporasi, zat cair pekat itulah yang merupakan produk yang berharga dan uapnya biasanya dikondensasikan dan dibuang.

2.5 Sifat fisika dan kimia bahan

Serbuk bunga rosella

Sifat fisik :      -  berwarna merah

- berasa asam

Sifat kimia :     - bersifat semipolar

- mudah larut dalam basa

Etanol 96%

Sifat fisik        - sedikit mengandung komponen air

- titik didih tinggi

- mudah menguap

Sifat kimia :     - sedikit basa

-    Bersifat racun pada konsentrasi tinggi

BAB III

METOODOLOGI KERJA

1.Alat  dan Bahan

1.1 Alat

Alat yang digunakan yaitu beaker glass 500 ml, anak timbangan, kertas perkamen, batang pengaduk, sendok tanduk, alat perkolasi, alat evaporasi, tabung reaksi, rak tabung reaksi,dan botol aquades,

1.2 Bahan

      Bahan yang digunakan yaitu serbuk simplisia bunga rosella, etanol 96 %.

1.3  Prosedur Kerja

1.1.1 Pembuatan simplisia bunga rosella

1.    Bunga rosella yang segar dicuci dengan air hingga bersih.

2.    Disortasi basah, bagian bunga yang kurang bagus dibuang.

3.    Dikeringkan dengan cara dioven dengan suhu 60⁰C

4.    Disortasi kering, bagian daun yang kurang kering atau gosong dibuang.

5.    Dihaluskan dengan mesin penggiling (blender), kemudian diayak dengan ayakan.

6.    Simplisia kering halus disimpan dalam wadah yang bersih dan kering.

7.    Simplisia kering siap untuk diekstrak.

1.1.2        Metode maserasi

1.      Menimbang serbuk simplisia kering bunga rosella sebanyak 50 g dan mengambil pelarut etanol 96 % sebanyak ± 250 ml (1:5).

2.      Merendam serbuk simplisia kering bunga rosella dalam cairan etanol selama 24 jam sampai pelarut jenuh.

1.1.3        Metode perkolasi

1.      Serbuk simplisia dari proses maserasi ditempatkan dalam suatu bejana silinder yang bagian bawahnya diberi sekat berpori.

2.      Mengalirkan cairan penyari etanol 96 % dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut. Cairan dibiarkan menetes dengan kecepatan 1 ml per menit sampai pelarut yang mengalir melalui simplisia tidak berwarna.

1.1.4  Metode evaporasi

1.       Ekstrak cair dari hasil ekstraksi bunga rosella dimasukan kedalam labu dasar bulat dengan volume 2/3 bagian dari volume labu dasar bulat yang digunakan.

2.       Memanaskan di waterbath/ pemanas sesuai dengan suhu pelarut yang digunakan yaitu suhu etanol sekitar 60 – 80⁰C, setelah suhu tercapai labu dasar bulat yang telah terisi ekstrak cair di pasang dengan kuat pada ujung rotor yang menghubungkan dengan kondensor.

3.       Menjalankan aliran air pendingin dan pompa vakum dijalankan, kemudian tombol rotor diputar dengan kecepatan tertentu (5-8 putaran). Proses penguapan ini dilakukan hingga memperoleh ekstrak yang ditandai dengen terbentuknya gelembung- gelembung udara yang pecah pada permukaan ekstrak atau jika sudah tidak ada lagi pelarut yang menetes pada alas bulat penampung.

4.       Setelah proses penguapan selesai, rotary evaporator dihentikan dengan cara terlebih dahulu dilakukan pemutaran tombol rotor ke arah nol (menghentikan putaran rotor) dan temperatur pada watherbath dinol kan. Pompa vakum dinol kan, kemudian pompa labu dasar bulat di keluarkan setelah sebelumnya kran mengatur tekanan pada ujung kondensor dibuka. Apabila proses pemekatan kurang maksimal, dapat dilakukan pemanasan biasa dengan menggunakan waterbath dengan bantuan pengadukan agar tidak gosong. Suhu watebath diatur sesuai dengan titik didih etanol.

1.4  Identifikasi Flavonoid

1.    Ambil 5 ml ekstrak bunga rosella tambahkan eter secukupnya, kemudian tambahkan 3 tetes H₂SO₄ pekat. Perubahan warna yaitu: warna merah sekali : +++, merah sedang : ++, sedikit : +.

2.    Ambil 5 ml ekstrak bunga rosella tambahkan 0,5 mL HCl pekat, serta berikan sedikit serbuk magnesium, perubahan warna menjadi merah atau serbuk bunga rosella 2 g tambahkan metanol, di panaskan selama 10 menit, lalu dipisahkan filtratnya tambahkan HCl tambahkan logam Mg larutan warna merah. Adanya aglikon flavonoid ditunjukkan dengan terjadinya warna merah atau jingga.

3.    Ambil 5 ml ekstrak bunga rosella, tambahkan NaOH perubahan warna menjadi kuning.

4.    Siapkan hasil ekstrak bunga rosella kemudian tambahkan 2 ml etanol 95%, 0,5 serbuk Zn dan 2 ml HCl 2 N, diamkan selama 1 menit. Lalu tambahkan 10 ml HCl pekat dan diamkan lagi selama 2 – 5 menit. Reaksi positif apabila terbentuk warna merah intensif.

5.    Sebanyak 3 tetes sampel bunga rosella diteteskan pada platetes kemudian tambahkan larutan FeCl₃ dan amati perubahan yang terjadi. Reaksi positif terjadi apabila terjadi warna hijau.  

6.    Pereaksi terdiri dari difenilboriloksietilamina P 1% dan polietilenglikol 4.000 P 5% dalam etanol. Lempeng disemprot dengan 10 ml larutan difenilboriloksietilamina P 1% kemudian disemprot dengan 8 ml larutan polietilenglikol 4.000 P 5%. Pereaksi penampak ini digunakan untuk mengamati flavonoid, aloin. Berpendar kuning intensif, hingga hijau dan jingga Pendaran akan segera nampak atau setelah 15 menit pada cahaya UV-365 nm.(www.KMIPAidentifikasiflavonoid.com)

BAB IV

PEMBAHASAN DAN KESIMPULAN

1.1  Hasil pengamatan

1.1.1        Metode maserasi

No.	Prosedur kerja	prosedur
1.	Menimbang serbuk simplisia kering bunga rosella sebanyak 86,7 g dan mengambil pelarut etanol 96 % sebanyak 300 mL.	Larutan berwarna merah muda
2.	Merendam serbuk simplisia kering bunga rosella dalam cairan etanol selama 2 hari sampai pelarut jenuh.	Larutan berwarna merah kehitaman

4.1.2    Metode penyaringan vakum

No.	Prosedur kerja	Pengamatan
1.	Hasil dari maserasi dilakukan penyaringan vakum	Menghasilkan filtrat dan residu Filtrat : larutan berwarna merah kehitaman Residu: serbuk berwarna merah

1.1.2        Metode perkolasi

No.	Prosedur kerja	Pengamatan
1.	Serbuk simplisia dari proses maserasi ditempatkan dalam suatu bejana silinder yang bagian bawahnya diberi sekat berpori.	Serbuk bunga rosella berwarna merah (hasil dari maserasi) dan menggunakan pelarut etanol
2.	Mengalirkan cairan penyari etanol 96% dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut.	Menggunakan pelarut etanol sebanyak 300 mL dan dihasilkan perkolat berwarna merah.

1.1.3        Metode Evaporasi

No.	Prosedur kerja	Pengamatan
1.	Ekstrak cair dari hasil ekstraksi bunga rosella dimasukan kedalam labu dasar bulat.	Ekstrak cair berwarna merah kehitaman sebanyak 350 mL.
2.	Dipanaskan sesuai dengan suhu pelarut yang digunakan yaitu suhu etanol 78oC, setelah suhu tercapai labu dasar bulat yang telah terisi ekstrak cair di pasang dengan kuat pada ujung rotor yang menghubungkan dengan kondensor.	Ekstrak cair diputar dengan pemanasan di dalam labu dasar bulat.
3.	Menjalankan aliran air pendingin dan pompa vakum dijalankan, lalu tombol rotor diputar. Sampai terbentuknya gelembung- gelembung udara yang pecah pada permukaan ekstrak atau jika sudah tidak ada lagi pelarut yang menetes pada alas bulat penampung.	Ekstrak cair terpisah dengan pelarut. Pelarut menguap dan terkondensasi menjadi pelarut jernih yang ditampung pada labu dasar bulat
4.	Setelah penguapan selesai, rotary evaporator dihentikan dengan cara memutar tombol rotor ke arah nol (menghentikan putaran rotor) dan temperatur pada watherbath dinol kan. Pompa vakum dinol kan, kemudian pompa labu dasar bulat di keluarkan setelah sebelumnya kran mengatur tekanan pada ujung kondensor dibuka	Dihasilkan ekstrak kental sebanyak 33mL berwarna merah kehitaman dan pelarut etanol (larutan tak berwarna)

4.2 Uji dentifikasi

            Ekstrak kental + aquades                 larutan zat berwarna merah muda

1.      Larutan zat + NaOH                    kuning

2.      Larutan zat + FeCl₃                     hijau tua

3.      Larutan zat + H₂SO₄                    merah

Perhitungan:

Berat serbuk bunga rosella = 86,7 g

Hasil ekstrak flavonoid = 33 mL = 0,033 L

% rendemen flavonoid = berat serbuk bunga rosella / hasil ekstrak flavonoid × 100 %

                                      = 86,7 g / 0,033 mL × 100 %

                                      = 262,727 %

4.3 Pembahasan

        Proses isolasi flavonoid dalam bunga rosella bertujuan untuk mengetahui metode yang digunakan untuk proses isolasi bahan alam khususnya flavonoid. Prinsip dasar isolasi flavonoid adalah ekstraksi pelarut. Ekstraksi pelarut merupakan pengambilan zat aktif dalam bahan alam dengan bantuan pelarut yang sesuai. Metode yang digunakan yaitu metode maserasi, perkolasi serta rotary evaporator. Metode maserasi merupakan proses perendaman simplisia dengan etanol 96%. Mekanisme kerjanya adalah memasukkan serbuk bunga rosella sebanyak 86,7 g ke dalam beaker glass dengan menambahkan etanol 96 % sebagai pelarutnya, pelarut yang tak berwana (bening) akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan larut (warna larutan penyari menjadi merah kehitaman) dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang diluar sel, maka larutan yang terpekat didesak ke luar dalam waktu 2 hari. Alasan menggunakan pelarut etanol 96% yaitu untuk menghasilkan ekstrak yang kental (murni) sehingga mempermudah untuk proses identifikasi. Tahap berikutnya adalah tahap penyarian dengan cara perkolasi. Proses ini dilakukan untuk menyempurnakan proses ekstraksi maserasi yang belum maksimal, karena kemungkinan ekstrak belum seluruhnya tersari oleh pelarut etanol, sebab keadaan pelarut etanol yang sudah jenuh. Lalu dilakukan perkolasi selama 4 jam sampai pelarut yang menetes dari serbuk simplisia berubah warna menjadi larutan tak berwarna. Keuntungan menggunakan cara penyarian ini adalah tidak memerlukan langkah tambahan karena sampel padat telah terpisah dari ekstrak. Mekanisme kerja perkolasi yaitu cairan penyari akan melarutkan zat aktif melalui sel-sel yang dilalui sampai mencapai keadaan jenuh. Dengan cara perkolasi, aliran cairan penyari menyebabkan pergantian larutan yang terjadi dengan larutan yang konsentrasinya lebih rendah. Selain itu, ruang diantara pori–pori akan membentuk saluran tempat cairan penyari mengalir. Setelah dihasilkan ekstrak hasil perkolasi berupa campuran antara zat aktif dan pelarut, untuk memisahkan zat aktif dalam pelarut maka dilakukan proses rotary evaporator dengan suhu 78^oC, karena dalam suhu tersebut pelarut akan menguap dan dihasilkan ekstrak kental dari bunga rosella. Alasan menggunakan metode tersebut karena prosesnya cepat dan mudah. Pada saat identifikasi digunakan reaksi warna meliputi FeCl_3, NaOH, dan H₂SO₄. Digunakan reagen FeCl₃ yaitu untuk mengidentifikasi gugus fenol, NaOH untuk identifikasi adanya senyawa fenol dalam kandungan flavonoid tersebut dan H₂SO₄ digunakan untuk mengidentifikasi adanya senyawa flavonoid golongan auron.

Kesimpulan       

Flavonoid dapat diperoleh dari proses ekstraksi bunga rosella, dengan metode maserasi, perkolasi dan rotary evaporator. Jumlah rendemen flavonoid yang diperoleh dari ekstraksi tersebut sebanyak  262,727 %.